毛细管电泳仪测定乳品中蛋白质

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《品研究与开发)05年 2月第 2卷第 1食 )0 2 6期

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毛细管电泳仪测定乳品中蛋白质孟序天津市乳品食品监测中心 3 0 8 0 3 1 1毛细管电泳仪是以毛细管为分离通道。以高压 直流电场为驱动力的液相分离技术。

05 .%羟丙基甲基纤维素， o尿素电泳缓冲液用 0 6m lp计调节 p H H值 3;配制 4 m l檬酸三钠 . 0 0m o柠 01 .%二硫代苏糖醇 6m l素样品缓冲液用 p o尿 H计调节 p H值为 8 ( .调节 p 0 H值溶液为 01 o柠檬酸 .m l 和 01 o氢氧化钠 ) .m l 。 32磷酸盐缓冲液制备： . 配制 2 mo磷酸二氢钠，.5 0m l 00%羟丙基甲基纤维素， o尿素电泳缓冲液用 p计调节 p 6m l H H值 30 .;配制 4 m l酸氢二钠，.%二硫代苏 0m o磷 01糖醇 6m l素样品缓冲液用 p o尿 H计调节 p H值为 8 (节p .调 0 H值溶液为 01 o磷酸和 0 1 o氢 .m l .m l 氧化钠 )。 33样液制备： .

它发展于 8 0年代中后期，是分析领域继高压液相色谱之后又一重大发展。长期以来该技术在医药方面应用广泛，可用于蛋白质分离、分析、糖 D A测序、 N手性药物分离、细胞分析等方面。虽单

然人们可从多种驯养动物那里获得乳，但是牛乳仍然是液态奶和其他乳制品主要来源。鲜牛乳含有 30一 .%蛋白质，其中 6%的为酪蛋白 . 35% 0

( N)1%为乳清蛋白， C,5剩余的多种小分子被统称为非蛋白质氮，酪蛋白微粒被称为胶束包括四种

主要蛋白质：5,5,,酪蛋白， a 1a 2 1 3他们的比例接近于 391 .:.;乳清蛋白是在牛乳清液中， .::61 3 3此类蛋白质呈球状主要是 1乳球蛋白(.2 3一 03%牛乳 )和仅乳球蛋白( .2一 01%牛乳 )。绝大部分定性定量分析乳品中蛋白质的方法要求首先分离乳清蛋白 和酪蛋白，毛细管电泳例外，而它可以提供一个快

液态牛乳样品按体积比 14加入样品缓冲液，: 奶粉 11:0蒸馏水稀释后按体积比 14加样品缓冲：液，在涡旋混合振荡器上混匀，置 0 静

.h以上， 5高速离心机 5 0 r 0离心 5 1 i, 0—0mn去除上层脂肪，. m 02 2u

速，高分辨率，良好量化并适合于各种混有乳的产品分析方法。2试验设备及材料 21毛细管电泳仪 (国贝克曼 MD .美 Q型)

滤膜过滤，滤液备用。4电泳条件选择：

蛋白质是由氨基酸通过酰胺键连接而成的高分子，子量差别较大，分氨基酸属两性分子，并有碱性、酸性、中性之分，应的蛋白质也是两性物对质。因为其折叠方式、空间结构和修饰基团的不同，还有亲水疏水之分。利用蛋白质的上述性质可选择毛细管区带电泳、电聚焦电泳、胶电泳、等凝 亲和电泳等多种方式。其中毛细管区带电泳分析

2涡旋混合器 . 2 2高速离心机 . 3 2涂层毛细管 ( . 4聚丙烯酰胺和聚乙烯醇 P A, V内径分别为 5,5 m) 07u25 P . H计

2药品( . 6优级纯以上 )磷酸二氢钠：尿素二硫代苏糖醇柠檬酸三钠氢氧化钠柠檬酸

磷酸氢二钠磷酸

乳品中蛋白质具有分析速度快、消耗低、果准确结的优点。 41在蛋白质分析时先采用二级管阵列检测器 . ( o对所分离的蛋白质进行全波长扫描，扫描 r A),从图中可以看到酪蛋白、乳清蛋白在 24a 1 m处都有明显吸收，以一般选择它作为检测波长。当我们所只检测一种蛋白质时也可根据 P A扫描结果采用 D2 0 2 0 24a 0、3、5 m检测波长。

羟丙基甲基纤维素

超纯水等

3样品及电泳缓冲液制备电泳缓冲液不仅影响管壁的状态，而且改变样品的性状，品处理、样电泳缓冲液和管壁涂层三者结合才能达到最好分离效果。研究经验表明对于蛋白质、多肽、氨基酸等两性样品采用酸性 (,2或碱 r ) H性 ( H 9分离条件。 P>) 31柠檬酸缓冲液制备： . 配制 3 m l檬酸，0m o柠檬酸三钠， 2m o柠 2 m l

42蛋白质在毛细管中吸附，源于疏水作用、 .静电作用和其他多种两相分配机制。因此绝对不能

使用裸管分离，会造成局部电压过高超过仪器这

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《食品研究与开发>05年 2 20月第 2 6卷第 1期

含乳饮料

中甜蜜素的测定张均媚刘伟娟薛刚天津市乳制品食品检测中心 3 0 8 03 1

甜蜜素又名环己基氨基磺酸钠是一种水溶性的新型甜味剂，甜度是蔗糖的 3 -0倍由于其价其 04 -,廉、甜度高，在食品中多做为蔗糖的代用品，但因其并

为 0 1 m/g - l gk体重/为此国家制定了强制性标准 日， G 70 19, B 26- 9 6亦是食品日常监督检测的项目之一。 饮料是甜蜜素广泛使用的领域之一。本方法是对含乳饮料中甜蜜素含量的一种测定方法，它基于甜蜜素能在酸性介质中与硝酸反应，生成的环己醇亚硝所酸酯正己烷抽提后可用气相色谱直接进样测定。方法

无营养价值，消费者如果经常食用甜蜜素含量超标的饮料或其他食品过量对人体的肝脏和神经系统造成

危害，特别是对代谢排毒的能力较弱的老者危害更明显阁且从毒理学评价来看 A I日允许摄入量 ), D(至仅_ _ _

的回收率为 9. 14%能满足微量分析的要求。 5%-0. 5 6

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承受范围，仪器产生冲击。一般测定蛋白质选对择抗吸附涂层管例如：聚丙烯酰胺和聚乙烯醇涂层管。 4 3毛细管长度、内径影响蛋白质出峰时间和 . 分离效果，毛细管长度在 4 m出峰时间在 5 i 0c 0m n 左右峰形较宽，5c出峰时间缩短到 2 i 2 m 0m n峰形较锐，毛细管长度缩短到 1 m以下时出峰当 5c虽然很快，可乳品中蛋白质已经分不开了。一般粗一点的毛细管有利于克服吸附提高检测灵敏

度，可以在较低的进样量下获得较高分辨率，但太粗的毛细管容易过热，因此我选择内径分别为5 7 m。 0, 5 u

44在实验过程中平衡电压选择非常重要， .针对不同缓冲液离子强度和涂层管应选择合适电压。经过多次实验柠檬酸盐缓冲液聚丙烯酰胺管选择 2 V 5 K平衡电压；磷酸盐缓冲液聚乙烯醇涂层管使用 3 K比较合适。 0 V4进样时间

压力控制样品量， . 5样品量太少有一些时 I rn司( i) a

图2

(。34。分别是 o 1。。5 2,6[乳球蛋白。乳球蛋白。 -o 1 1 3 o1。。 6。 3 y酪蛋白)

从图中看到牛乳中几种蛋白质利用毛细管区

带电泳分析方法可快速检测出来，当然我们也可以使用等电聚焦按等电点从小到大分离；可使用凝亦胶电泳按分子量大小分离。国外报道使用毛细管电泳方法来判断乳酪发酵过程中酪蛋白含量变化，国内乳酪生产厂家凤毛麟角，但我曾使用此方法做过豆浆、羊奶、水解动植物蛋白与牛奶的比对，发现牛奶的特征明显，利用该特征鉴别非牛乳蛋白质有效控制一些不法厂家通过加入乳香精的办法掺伪，实现根据乳产品实际乳蛋白含量按质论价。 参考文献：[] 1陈义等.《毛细管电泳技术及应用》化学工业出版社 20, 1 L 2 00:l- 4 9 9l[] cw r, l l r . nl hm 19,413 2 Sh az E Ufd A a C e .92 6: 7 tH e eK 7 c] r a a aJ h m t r19,8:1 3 A a w e C r a g.946 0 k H t o o l 57收稿日期：0 4" - 6 20一 1

含量少蛋白质峰面积很小定量不准，相反进样量过大会造成分离度不好峰拖尾。根据样品含乳量我们选择 0 s 和 1两种进样方式。 .pi s 0 5 5 s 46分离温度的选择主要取决于凝胶或筛分体系， . 如果使用聚丙烯酰胺和聚乙烯醇涂层管一般控制在 2— 5￣I较合适。 5 3 C: E5结果及讨论

图一是聚丙烯酰胺管 (5c柠檬酸盐缓冲液 2 m) 2K 5 V平衡电压 05 s 0s . pi进样，温度 2 l 5℃时分离效果图；图二是 P A管 (5c )酸盐缓冲液 3 V 2 m磷 0 K V平衡电压 0 s1进样，温度 2 . pi s 5 0 5℃时分离效果图