4-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

实验四 血清蛋白醋酸 纤维薄膜电泳【目的要求】 目的要求】 1、掌握电泳技术的一般原理和基本操作过程。 2、熟悉血清中蛋白分类以及电泳分离操作。

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

【实验原理】 实验原理】1.电泳： 1.电泳：是指带电粒子在电场中向本身所带电 电泳 荷相反的电极移动的现象。 荷相反的电极移动的现象。 在一定pH条件下， pH条件下 在一定pH条件下，不同的蛋白质由于具 有不同的等电点而带不同性质的电荷， 有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而 在一定的电场中它们的移动方向和移动速度 也不同，它们的电泳迁移率不同。 也不同，它们的电泳迁移率不同。

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

V=EQ/(6πrη) M=V/E=Q/(6πrη)

V:电泳速度 E:电场强度 r:球形分子半径

M:迁移率 Q:颗粒带电荷量 η:介质粘度

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

【实验原理】 实验原理】2. 影响电泳的因素： 影响电泳的因素： 内在因素：蛋白所带净电荷的量、 内在因素：蛋白所带净电荷的量、蛋白 的大小和形状 外界因素：电场强度、溶液的pH pH值 外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶 液的离子强度和电渗现象

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

3.醋酸纤维素溶于有机溶剂( 丙酮、氯仿、 3.醋酸纤维素溶于有机溶剂(如：丙酮、氯仿、氯 醋酸纤维素溶于有机溶剂 涂抹成均匀的薄膜则成 乙烯、乙酸乙酯等) 乙烯、乙酸乙酯等)后，涂抹成均匀的薄膜则成 为醋酸纤维素薄膜。 为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结 构，厚度约为120μm,有很强的通透性，对分子 厚度约为120 120μ 有很强的通透性， 移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、 移动阻力很小。该薄膜电泳具有微量、快速、简 分辨力高， 便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

血清蛋白参考值等电点 清蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 β球蛋白 γ球蛋白 4.64 5.06 5.06 5.12 6.85 分子量 (kDa) 69 200 300 90~150 156~950 占总蛋白的 百分数(%) 61~71 3~4 6~10 7~11 9~18

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度 分为5条区带，从正极端依次为清蛋白、α1球蛋 分为5条区带，从正极端依次为清蛋白、α1球蛋 α2球蛋白 球蛋白、 球蛋白及γ球蛋白， 白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白，经染色可 计算出各蛋白质的百分含量。 计算出各蛋白质的百分含量。

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

【实验器材】 实验器材】DYY-6C型 双稳定时电泳仪和DYY DYY1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和DYY-Ⅲ型电泳槽 2.醋酸纤维薄膜 醋酸纤维薄膜( cm×8cm): ):1 2.醋酸纤维薄膜(2 cm×8cm):1片/人。 3.培养皿 一排桌子公用5 培养皿： 包括平衡、 3.培养皿：一排桌子公用5套，包括平衡、染色各 用一套，漂洗用3 用一套，漂洗用3套。 4.点样器 载玻片。 点样器： 4.点样器

:载玻片。 5.滤纸 公用。 滤纸： 5.滤纸：公用。 6.镊子 一个/ 镊子： 6.镊子：一个/组。

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

【实验试剂】 实验试剂】1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6,0.07 巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6, (pH8.6 mol/L,离子强度0.06) mol/L,离子强度0.06) 氨基黑10B 10B染色液 2、0.5% 氨基黑10B染色液 3、漂洗液

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

【实验操作】 实验操作】

1.浸泡 1.浸泡 cm醋酸纤维薄膜置于电泳缓冲液中 醋酸纤维薄膜置于电泳缓冲液中， 将2×8 cm醋酸纤维薄膜置于电泳缓冲液中， 浸泡15 min左右 至完全浸透，方可用于点样。 左右， 浸泡15 min左右，至完全浸透，方可用于点样。

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

2.点样 2.点样 用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸 用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸 多余的缓冲液，迎光判断光面与无光泽面 无光泽面。 干多余的缓冲液，迎光判断光面与无光泽面。用边 缘整齐的玻片沾取少量无溶血血清， 缘整齐的玻片沾取少量无溶血血清，垂直按压于醋 少量无溶血血清 纤膜标号一端约1.5纤膜标号一端约1.5-2㎝处(约2~3μl) 标号一端约1.5

生物化学和分子生物学教学课件。好东西哈,一起分享了。

3.电 3.电 泳 点样端的薄膜平贴在阴极滤纸桥上 的薄膜平贴在阴极滤纸桥上( 将点样端的薄膜平贴在阴极滤纸桥上(点样 面朝下),另一端平贴在阳极滤纸桥上(见下图) ),另一端平贴在阳极滤纸桥上 面朝下),另一端平贴在阳极滤纸桥上(见下图)。 要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直 中间不能下垂。 紧贴滤纸桥并绷直， 要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。 平衡片刻(2-3min);使其自然充满缓冲液； 平衡片刻(2-3min);使其自然充满缓冲液； (2 而后电压120V,电流0.4~0.6mA/㎝,通电45分 0.4~ 45分 而后电压120V,电流0.4 0.6mA/㎝ 通电45 120V 钟。 …… 此处隐藏：1303字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……