对猪细小病毒(PPV)SD-68株NS1基因进行了克隆和序列测定,结果表明SD-68株NS1基因全长1989bp,编码662个氨基酸组成的多肽。该序列与PPV SY-99株、Kresse株、NADL-2(5075)和NADL-2(4973)株的NS1基因比较,核苷酸的同源性分别为99.9%、99.9%、99.7%、98.1%,氨基酸的同源性分别为

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第 l 9卷 3期 20 0 4年 6月

中国病毒学VI ROLOGI CA I CA S NI

1 (:2 22 4 9 3) 4 .4J une 2 O04

用Vr eo细胞制备马抗狂犬病血清抗原张捷一，,叶林柏，曾莹春，阳帆，刘静 (.武汉大学生命科学院病毒研究所，湖北武汉 40 7; .武汉生物制品研究所，湖北武汉 4 0 6 ) 1 30 2 2 3 00

Fo e a i g t eAn i e fRa isI m u g o u i r l rPr p rn t n o b e m h g no l b l i Ve o Cel n n sZHA N G i’, YE n b il, ZEN G n c un l YANG n J el Li— a Yi g— h , Fa, LI Jn U i g l

r.ntue fvrlg, h nU i ri, h n4 0 7,hn; . u a s tt o boo i l rd cs W h n4 0 6, hn ) J Istt i oyWua nv syWua 3 0 2C i 2 W h nI t e f ilgc p u t u a 3 0 0 C i i o o e t a ni u a o, a

Absr c: sa ls a fe tve e on mi a d smpl e h ol g o r p rn a e r la tg n t a t To e t b ih e f ci, c o c la i n n et c n o y f rp e a i g r bi svia i e n t tC e u e o pr u e h s t—a e e u,r bi s v r s sr i s i o u ae n v r e l ha a b s d t od c or e a ir bi s s r m n n a e iu ta n wa n c l t d i e o c ls

c l r d wi e i m o t i i g % h r e s r m n s p o a ae t 9 c l r d u u t e t m d u c n a n n 1 u h 0 o s e u a d wa r p g t d wi 1 u t e me i m h 9 uc nt ni g%一3% h r e e m .Vi s o a n l i o s s r u u r we e a v se a t e if a d i h ys n d s d o r r h r e td t h f t n e g t da a u e f h h pr p rng

a tg n o e ra i n,i a tva on a d e tiu to e a i i e s by c nc nt to n n ci t i n c n rf gai n.The tt r f r bi s v r s i e ie s o a e i n t u h

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摘要：以 V r eo细胞为基质制备马抗狂犬病血清用抗原，以期建立有效、经济、简便的抗原制备方法。用含 1% 0马血清营养液对 V r eo细胞作适应性培养，接种狂犬病毒，以含 1 3%~%马血清营养液作维持液培养病毒，于第 5, 8收获病毒液，经灭活、浓缩、离心等制成抗原。第 5天收获病毒滴度可稳定在 70o L。 mL以上，灭活天，8 .1g D5/抗原具良好的抗原性，用 N H法测定效价达 60U/ I . I mL以上，可用作抗原生产抗狂犬病血清。关键词： V r胞；马血清；抗原 eo细

中图分类号：￥ 5 .5 8 26

文献标识码：A

文章编号：10—1 2(0 4 0 .2 20 0 35 5 2 0 ) 30 4—3

狂犬病是一种由狂犬病毒引起的危害极为严重的人畜共患疾病，人一旦发病，死亡率为 1 0 0%。

型疫苗【,是以传代细胞为基质，脱了动物条件限 2】摆制，制备工艺稳定简化，但该疫苗生产过程中同样使用人白蛋白，不符合制备马抗狂犬病血清抗原生产要求【, j因此我们对制备用于生产马抗狂犬病血清 J的抗原的制作方法加以改进，现将以 V r eo细胞为基质制备抗狂犬病马血清抗原的研究报告如下。

目前主要通过预防接种狂犬病疫苗及联合使用高

免血清或免疫球蛋白来控制该病的发生和流行。由于人抗狂犬病特异性免疫球

蛋白远远不能满足市场需求，精制马抗狂犬病血清仍在广泛使用【。 l】我国制备马抗狂犬病血清免疫马所使用的抗原是人用狂犬病疫苗，包括羊脑固定毒抗原和地鼠。肾细胞疫苗。羊脑固定毒抗原制备繁琐复杂，受诸多动物条件限制；而地鼠。胞疫苗在其制备过程中肾细使用人白蛋白作为病毒抗原的保护剂，因此使用这种抗原免疫的马血清含有抗人白蛋白抗体。我们曾采用人白蛋白吸附的方法去除血清中的抗人白蛋白

1材料与方法11细胞 .

V r细胞来源于武汉大学生命科学院病毒研 eo究所。培养液为含 1%马血清 1 9液，用常规细胞 0 9传代方法【作适应性传代培养。 4】 1毒种 . 2狂犬病毒 a株 (鼠脑 )来源于武汉生物制 G豚品研究所。V r eo细胞适应马血清培养后，将毒种在

抗体，但这一步骤大幅度提高了抗狂犬病血清的成本。人用 V r eo细胞狂犬疫苗是近几年研制成功的新

收稿日期：20 .10,修回日期：2 0 .21 0 31-5 0 31.6作者简介：张捷 ( 9 8)女，广东省籍，在职研究生，主要从事生物制品研究。 16一， “通讯作者：C r so dn Au rT l 2—7 8 3 2 - i ib ie oma . m. o r p n ig￣o . e:0 78 6 2 7,E ma:l ay@h t ic e l n lo

对猪细小病毒(PPV)SD-68株NS1基因进行了克隆和序列测定,结果表明SD-68株NS1基因全长1989bp,编码662个氨基酸组成的多肽。该序列与PPV SY-99株、Kresse株、NADL-2(5075)和NADL-2(4973)株的NS1基因比较,核苷酸的同源性分别为99.9%、99.9%、99.7%、98.1%,氨基酸的同源性分别为

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张

捷，等.用 V r eo细胞制备马抗狂犬病血清抗原

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V r胞上作适应性培育， eo细连续传代：接种病毒后， 以含 1 3%~%马血清 1 9液作维持培养。 9 1病毒滴定 . 3

毒力并连续传代，结果显示连续传 1 O代后基本适应。1 1~ 2代毒力为 4O . lg D 0 L, 1~ 1 .~55 o L s m / 3 8代毒力可达 58~75o L 0 L。 .3 . g D5 m 1/

用小鼠脑内接种法进行【。 3将病毒液做 1倍系】 O列稀释，用体重 1g 1g小鼠脑腔注射，00 mL l~ 3 .3/只，每个稀释度至少注射 4只小 …… 此处隐藏：5681字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……