全长cDNA文库的构建方法

关于cDNA文库构建的方法原理流程及试剂盒等

中国农学通报第２２卷第２期２００６年２月

ｈｔｔｐ：／／ｚｎｔｂ．ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｃｎ

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全长ｃＤＮＡ文库的构建方法

董志敏

１，２

，张宝石１，关荣霞２，常汝镇２，邱丽娟

２

２

（１沈阳农业大学农学院，沈阳１１０１６１；中国农科院作物所农业部作物种质资源

与生物技术重点开放实验室，北京１０００８１）

摘要：全长ｃＤＮＡ文库的构建是进行功能基因组研究的一种经济、快速、有效的途径，克服了传统

ｃＤＮＡ文库的缺点，节省了基因克隆和功能鉴定的时间，促进了功能基因组的研究进程。目前有６种构

建全长ｃＤＮＡ文库的方法，包括Ｏｌｉｇｏ－Ｃａｐｐｉｎｇ、ＣＡＰｔｕｒｅ、ＳＭＡＲＴ、ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ、ＣａｐＳｅｌｅｃｔ、ＣＡＰ－

文库构建技术、实验操作复杂程度和文库构建质量等方面构存ｊｕｍｐｉｎｇ。这几种方法在起始材料用量、

在不同程度的优缺点，但综合比较而言，ＳＭＡＲＴ和ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ这两种方法比较有实际应用价值。快速地构建一般质量的ｃＤＮＡ文库，如果采用Ｌｉｔｔｌｅ－ｃｙｃｌｅＳＭＡＲＴ和Ｌａｒｇｅ－ｓｉｚｅＳＭＡＲＴ法适于简单、

ＳＭＡＲＴ这两种改进技术，所建文库质量也非常好；ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ法虽然对实验技术要求较高，实验过程复杂，但所建文库全长率高，冗余性低，建库效率高，是目前构建高质量文库最好的方法。帽子结构；ｃＤＮＡ文库的构建关键词：全长ｃＤＮＡ；５’

ＴｈｅＭｅｔｈｏｄｓｏｆＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｔｈｅＦｕｌｌＬｅｎｇｔｈｃＤＮＡＬｉｂｒａｒｙ

ＤｏｎｇＺｈｉｍｉｎ１，２，ＺｈａｎｇＢａｏｓｈｉ１，ＧｕａｎＲｏｎｇｘｉａ２，

ＣｈａｎｇＲｕｚｈｅｎ２，ＱｉｕＬｉｊｕａｎ２

（１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０１６１；２ＫｅｙＬａｂｏｆＣｒｏｐＧｅｒｍｐｌａｓｍ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，

ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＩｎｓｒｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐｓ．ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｉｓｒｅｇａｒｄｅｄａｓａｎｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ，ｒａｐｉｄａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｗａｙｔｏｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｉｔｗｅｌｃｏｍｅｓｔｈｅｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇａｎｄｓａｖｅｔｈｅｔｉｍｅｏｆｇｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｒｅｓｕｌｔｉｎａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｔｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｉｎｃｌｕｄｅＯｌｉｇｏ－Ｃａｐｐｉｎｇ，ＣＡＰｔｕｒｅ，ＳＭＡＲＴ，ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ，ＣａｐＳｅｌｅｃｔａｎｄＣＡＰ－ｊｕｍｐｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．．Ｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｄ，ｔｈｅｓｅｍｅｔｈｏｄｓｅｘｉｓｔｔｈｅｉｒｏｗｎａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｉｎｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｓｔａｒｔｍａｔｅｒｉａｌｓ、ｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｄｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｔｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ．ＩｔｉｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｈａｔｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｔｈｅＳＭＡＲＴａｎｄＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒｍｅｔｈｏｄａｒｅｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｕｔｉｌｉｔｙ．ＴｈｅＳＭＡＲＴｍｅｔｈｏｄｉｓａｄａｐｔｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅａｓｉｌｙａｎｄｒａｐｉｄｌｙｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗｉｔｈａｖｅｒａｇｅｑｕａｌｉｔｙ．Ｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｔｈｅｌｉｂｒａｒｙｃａｎｂｅｉｍｐｒｏｖｅｄ，ｉｆｔｈｅＬｉｔｔｌｅ－ｃｙｃｌｅＳＭＡＲＴａｎｄＬａｒｇｅ－ｓｉｚｅＳＭＡＲＴｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｒｅｕｓｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ．ＴｈｅＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒｍｅｔｈｏｄｉｓａｄａｐｔｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗｉｔｈｈｉｇｈｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｒａｔｅ、ｌｏｗｒｅｐｅａｔｒａｔｅａｎｄｈｉｇｈｅｆｆｉｅｎｃｙ，ａｓｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓｈｉｇｈａｎｄｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｉｓｃｏｍｐｌｅｘ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｔｈｅＦｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡ，５’－ｅｎｄｃａｐｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＴｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｌｉｂｒａ …… 此处隐藏：398字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……