用药物与临床 2 0 1 3年第 1 6卷第 7期

P r a c t i c a l P h a r ma c yAn d C l i n i c a l R e me d i e s . 2 0 1 3 . V o 1 . 1 6 . No . 7

药学研究

H P L C法测定人血浆中咖啡因含量的不确定度评定赵娜萍，王[摘要] 目的

卓，张黎，高申

对高效液相色谱法测定血浆中咖啡因的不确定度进行分析，找出影响因素，对不确定度

进行评估，如实反映测量的置信度和准确度。方法采用 A C E 5 C旷A R柱 ( 1 5 0 mm×4 . 6 m m, 5 m),流动相： 甲醇- 0. 2%醋酸溶液 ( 1 7: 8 3),检测波长： 2 7 3 B i n,流速： 1 . 0 mL/ mi n,测定咖啡因含量后，建立数学模型，分析过程中各分量引起的不确定度，采用 A类评定程序评价随机效应引起的不确定度， B类评定程序评价其他因素引起的不确定度。结果置信概率 P为 9 5%时，血浆中咖啡因可表示为：低浓度 (1 0 5 8 . 0 8±2 9 . 2 4) n g/ mL,中浓度( 3 4 8 9 . 5 3±9 0 . 2 1 ) n g/ mL,高浓度 ( 8 4 5 3 . 3 2±1 1 5 . 9 2 ) n g/mL。结论 该方法适用于 HP L C法测定血浆中咖啡

因浓度的不确定度评定，能为复杂生物样品分析过程的不确定度评定提供一定参考。

[关键词] 咖啡因；不确定度； HP L C;血浆

Unc e r t a i nt y e v a l ua t i o n i n c o nt e nt de t e r mi n a t i o n o f c a l y e i ne i n p l a s ma b y H PLCz H A0 N a— p i n g, wA N G Z h u o, Z HA N G L i, G AO S h e n ( De p a r t me n t o f P h a r ma c y, C h a n g h a i H o s p i t a l, S e c o n d Mi l i t a r yMe d i c a l Un i v e r s i t y, S h a n g h a i 2 0 0 4 3 3, Ch i n a )

[ Ab s t r a c t] Ob j e c t i v e T o a n a l y z e t h e me a s u

r e me n t u n c e r t a i n t y i n d e t e r mi n a t i o n o f c a f f e i n e i n p l a s ma b yHP L C, a n d i d e n t i f y t h e i n l f u e n c i n g f a c t o r s t o a s s e s s t h e u n c e r t a i n t y . Me t h o ds Th e ACE 5 C】 8一 AR ( 1 5 0 mm×4 . 6mm, 5 m) wa s u s e d, t h e mo b i l e p h a s e c o n s i s t e d o f me ha t no l _ o . 2% a c e t i c a c i d( 1 7: 8 3), he t l f o w r a t e wa s 1 . 0 mL/mi n. a n d t h e d e t e c t i ve wa v e l e ng h t wa s 2 73 am . The m a he t ma t i c a l mo d e l wa s e s t a bl i s h e d t o a n a l y z e he t s o u r c e o f u nc e r— t in a t y. Th e u nc e r t i nt a y c a u s e d b y v a r i o us f a c t or s i n t he who l e p r oc es s o f d e t e r mi na t i on wa s e v a l ua t e d. h e T un c e ta r i n t y c a us e d b y r a nd om e f f e c t s wa s e va l u a t e d wi h t t yp e A n d a o t he r s we r e e v lu a a t e d wi h t t y p e B. The c o mb i n e d un c e r t in a t y wa s he t n ina f l l y o b t a i ne d by s y n t h e s i z i ng he t u nc e￣a i nt i e s o f va r i o us c o mp on e nt v a r i a bl e s . Re s ul t s Th e e x pa n d e d a n—

c e ta r i n t y f o r l o w, me d i u m nd a h i g h l e v e l o f c a f f e i

n e c n a b e e x p r e s s e d ( 1 0 5 8 . 0 8士2 9 . 2 4) n g/mL, ( 3 4 8 9 . 5 3±9 0 . 2 1 ) n g/ mL nd a ( 8 4 5 3 . 3 2±1 1 5 . 9 2) i r g/ mL, r e s p e c t i v e l y( P=9 5%) . Co n c l u s i o n T h e me ho t d i s_ d p p l i c a b l e f o r he t u n c e r—t a i nt y e v a l ua t i o n o f c ff a e i n e d e t e r mi na t i o n i n pl a s ma . I t pr o vi d e s n a i mpo ta r nt r e f e r e nc e or f he t u nc e￣a i nt y e v a l u a t i o nf o r t h e d e t e m i r na t i o n i n c o mp l e x bi ol o gi c a l s a mp l e .

Ke y wo r ds: Ca f f e i n e; Un c e r t a i nt y; HP LC; Pl a s ma

国家质量技术监督局于 1 9 9 9年批准颁布了 J J F I O 5 9— 1 9 9 9 9 (测量不确定度评定与表示》…,中

学提供 ),甲醇为色谱纯试剂 ( T E D I A);其余试剂均为市售分析纯。

国实验室国家认可委员会编写的《化学分析中不采用岛津 L C一 2 0 1 0 A型 H P L C系统，色谱柱： 确定度的评估指南》 要求，实验室在实施认可准 AC E 5 C1 8一 A R( 1 5 0 mm× 4 . 6 m m, 5 i x m),分析天则( I S O/ I E C 1 7 0 2 5— 2 0 0 5 )时，必须建立并实施测量平： ME T T L E R T OL E DO(型号： A G 2 8 5 )。 不确定度的评估程序，完整的定量分析结果必须 2方法包括测量值及其不确定度，以评价测试结果的准 2 . 1溶液的制备①咖啡因储备液：精密称取咖确性和可靠性。本实验室成功建立了测定人血浆啡因对照品 0 . 0 2 5 0 g于 2 5 m L棕色容量瓶中，用中咖啡因浓度的 HP L C法。由于血浆样品成分比甲醇稀释至刻度，即得 1 mg/ m L储备液。将储备较复杂，前处理

影响因素较多，不确定度评定比较液置于冰箱中 ( 4℃ )保存备用。②二羟丙茶碱储困难，目前国内外有少数相关文献报道，但是备液：精密称取二羟丙茶碱对照品 0 . 0 1 2 5 g,置于所用评定标准并没有统一。笔者综合各类文献和指南，对H P L C法测定人血浆中咖啡因浓度进行不确定度评定方法进行探讨，为方法学研究提供有益的指导。 1仪器与试剂咖啡因、内标二羟丙茶碱对照品 (第二军医大

2 5 m L棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得

5 0 0 m L内标储备液，于4℃冰箱内保存。③用 5 mL移液管取 1 mL咖啡因储备液于 1 0 0 m L容量瓶中，定容至刻度，得 4￣ g/ mL溶液；取 1 2 . 5 mL Z.羟丙茶碱储备液定容至 1 0 0 mL,得 0 . 5 g/ m L内标溶液。 2 . 2 H P L C条件选用 A C E 5 C 1 8 - m R( 1 5 0 mm× 4 . 6 ml T l, 5 m)色谱柱；流动相：甲醇 - 0 . 2%醋酸溶液 ( 1 7: 8 3),流速： 1 . 0 mL/ mi n;检测波长：

收稿日期： 2 0 1 2— 0 9— 2 5

作者单位：第二军医大学长海医院药学部，上海 2 0 0 4 3 3通信作者